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发布时间:2022-07-17 21:19:00 作者:山东康德莱净化
实验操作小贴士
1、实验应在超净工作台或者生物安全柜内进行;
2、实验的过程中选择尺寸的手套并能及时更换,在进出不同实验区域或进行模板操作后都应更换实验服、口罩、帽子及手套,以避免不同实验区交叉污染;
3、装有PCR试剂的反应管在打开之前应先瞬时离心,将管壁及管盖上的液体离至管底,降低污染手套或加样器的风险;谨慎开启反应管,防止管内液体溅出或形成气溶胶导致污染;需要高温加热的样本,可采用封口膜进行PCR管盖密封,避免管盖应受热而发生弹开;
4、吸加试剂和模板的操作应严格按照规范要求进行,遵守“慢吸快打”原则,尽量一次性完成,忌多次抽吸,以避免气溶胶产生的交叉污染;
5、PCR试剂建议小量分装,以减少反复冻融、重复取样次数和反复使用过程中的试剂污染;多样本PCR反应时,先配制反应混合液分装至反应管中,加入样本核酸,请勿同时开盖,尽量保证单人单管,实现完全闭管操作;
6、实验试剂应与样品和PCR产物分开保存,不应放于同处;
7、PCR扩增实验完成后及时将反应管取出,用一次性手套或者塑封袋将产物反应管包裹丢弃,保证管盖紧闭;
8、实验室自配试剂(去离子水、缓冲液等)和所有使用器具在使用之前均应高压灭菌或紫外杀菌,尖、反应管等实验耗材应一次性使用。
如何防止PCR实验室气溶胶污染?
现实生活中,我们可以通过开窗通风、佩戴口罩等防护用品来降低气溶胶传播风险。类似地,目前PCR实验室主要通过以下措施来防范和控制实验室污染:
(1)建设独立的PCR实验室,按试剂准备区、样本制备区、扩增及产物分析区进行严格分区,把低污染风险操作和高污染风险操作在空间上隔离开来。
(2)打造专门的负压通风系统,控制实验室空气从低风险区向高风险区单向流动,避免保存试剂被一次性全部污染。
(3)制定严格的实验室管理条例,控制人员物品单向流动,要求操作人员全程严格进行360度无死角全身防护。
(4)抬高实验人员门槛,需要经过上级单位规范培训、考核并获得“PCR上岗证”的人员方能上岗工作。
(5)PCR反应液分装保存,减少重复加样次数,降低试剂被污染风险。
(6)在PCR试验中加入内标、阴阳性对照等质控,监测检测结果,避免出现假阴性或假阳性。
(7)实验室温度控制在18~27℃,湿度控制在30%~70%。
(8)定期使用75%乙醇、含氯消毒剂和核酸去除剂及紫外线照射进行消毒等。
pcr实验室个性化用药
药理学和基因组学的发展,阐明了代谢和效应个体差异的遗传本质,异常反应主要是因为代谢酶基因变异而导致酶活性异常,进而导致服药后体内未能被正常代谢、消除而排出体外,使得体内浓度过高或过低,达不到理想的治果。这种异常反应,可通过检测与患者所服用相关的遗传基因,调整剂量或寻找替代,地制定出更合理、有效、经济的方案。
示例:个体化用药指导检测:CYP2C19基因突变检测试剂盒、CYP2C9基因突变检测试剂盒、ALDH2基因突变检测试剂盒、MTHFR基因突变检测试剂盒。
方法学:荧光PCR法。
用途:氯吡格雷、华法林、甘油及叶酸均为临床上常见的,用药指导分子生物学检测,明确基因分型,药学部临床药师根据检测结果,并综合考虑患者自身因素、临床诊断以及联合用药等相关信息,为临床出具个体化用药建议。
标本类型:全血(本试剂盒无需提取DNA,加样直接PCR)。
检测流程:
(1)配制反应体系(在样本准备区完成)→(2)直接加入全血(在标本制备区完成)→(3)PCR 扩增(在扩增区完成)→(4)结果分析与判定。
其他同类项目:他汀类用药(ApoE)、β受体阻滞剂(ADRB1)、儿童安全用药、靶向个性化用药(***R、kRAS)类。
适合开展的医院和:医院、医院、第三方、各种级别的有需求的医院。
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